بررسی اثر امواج فراصوت بر میزان لقاح آزمایشگاهی تخمک و تکوین آن تا مرحله بلاستوسیست در موش

چکیده:

در حدود چند دهه است که از امواج فراصوت به منظور مشاهده ی رشد فولیکولهای تخمدانی در زنانی که متحمل لقاح آزمایشگاهی و انتقال جنین (IVF-ET) می شوند، استفاده می شود. در حالی که آزمایشهای بسیاری در رابطه با تاثیر این امواج بر سیستم های زیستی ، طراحی و انجام شده است، گزارشات اندکی مبنی بر تاثیرات مخرب یا مفید این امواج در دامنه ی تشخیصی وجود دارد. اما نظر به استفاده ی گسترده از این امواج و لزوم پیش بینی خطرات احتمالی و یا حتی تاثیرات مثبت و مفید احتمالی در آینده ، نیاز به طراحی آزمایشات بیشتر احساس می شود.

در مطالعه ی حاضر هدف، بررسی اثر امواج فراصوت (Ultrasonography) در دامنه ی تشخیصی بر میزان لقاح ازمایشگاهی (Fertilization rate) ومیزان تکوین تا مرحله ی بلاستوسیست (preimplantation development rate) در تخمک موش می باشد.

به این منظور ، موش های ماده ی سوری نژاد NMRI با سن 6 تا 8 هفته را انتخاب کرده و به صورت تصادفی در دو گروه شاهد و مورد تقسیم بندی می کنیم. در گروه مورد، موش ها مجدداً به شیوه ی تصادفی به 3 گروه بر حسب دفعات موج دهی (1 یا 2 یا 3 مرتبه) تقسیم می شوند. موج دهی در گروه های مورد در طی 3 روز سیکل جنسی (Estrous cycle) القا شده با هورمون انجام می شود.

با استفاده از یک سیستم موج دهی که در آن موش در فاصله ای به اندازه LAM (Last Axial Maximum) ا زیک پروب استوانه ای ، با فرکانس MHZ 3 ، موج ممتد (CW) قرار می گیرد تخمدان ها و در کل سطح شکمی رو به پروب ، فراصوت دهی می شود.در این مدل موج دهی ، فاصله ی بین پروب و موش توسط یک کیسه ی پلاستیکی مخصوص ، حاوی ژل فراصوت با ابعادی قابل تغییر (با اعمال فشار)، پر می شود..

عوامل تابش (شدت و زمان پرتو دهی)، طوری انتخاب می شوند که در حین موج دهی افزایش دمای محیط حداکثر 1.5˚c باشد. در پایان سیکل (صبح روز بعد از تزریق HCG )، موش ها را به روش قطع نخاع کشته،اویداکت آنها را خارج می کنیم، به روش مکانیکی بخش متسع شده ی آن (آمپولا) را پاره کرده، اووسیتهای بالغ MII (متافاز II ) را خارج می کنیم و بعد به روش IVF با اسپرم موش سوری نر نژاد NMRI لقاح می دهیم. سپس به بررسی و مقایسه ی گروههای کنترل و آزمایشی از نظر میزان لقاح(کل اووسیت های  M11/ تعداد اووسیت های لقاح یافته FR= )  می پردازیم.سپس جنین ها به محیط کشت منتقل می شوند و در هر گروه Development rate جنینها تا رسیدن به مرحله ی بلاستوسیست اندازه گیری شده و مقایسه می شود،سپس به منظور شمارش تعداد سلولهای ICM ,OCM از رنگ امیزی افتراقی یا Diffrential توسط رنگ های فلورسنت Hoechst , PI استفاده می شود.